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  • 中國首次公布對待實驗動物國家標準

    中國首次公布對待實驗動物國家標準

    近日,中國實驗室動物研究小組和英國3R計劃(即替代-Replacement、減少-Reduction和優化-Refinement實驗動物)國家中心(NC3Rs)的工作人員在中國舉行會議。 會議中,中國**公布了對待實驗動物的國家標準草案,并將在2016年年底正式實行。國家標準草案中設定了有關動物安樂死、疼痛治療、運輸、居住條件、養殖設施和培訓等多方面的要求。 中國科學家們曾一再強調,由于國內缺乏對待實驗動物的國家標準規范,導致一些國際性的研究合作總是無法正常開展,因為其他國家的科學家們不愿參與包含不受人道主義保護的動物在內的研究。 此外,虐待實驗室動物事件*近屢屢遭曝光,因此國內反對虐待實驗室動物的浪潮也愈發高漲。中國科學家希望這一國家標準將會改善實驗動物的生活條件,并且促進中國與國際在學術領域的研究合作。 中國醫學科學院醫學實驗動物研究所所長秦川表示,新的國家標準基于國際上對待動物的*佳實踐標準。雖然中國此前并未規定相應的國家標準,但國內多省都可證實國內實驗室的做法基本符合全球公認標準。不過,國內的實驗室還是需要國家標準來統一戰線,明確如何才是對動物**的做法。
    03-28 2016
  • 三代基因組測序技術原理簡介

    三代基因組測序技術原理簡介

    從1977年第一代DNA測序技術(Sanger法)1,發展至今三十多年時間,測序技術已取得了相當大的發展,從第一代到第三代乃至第四代,測序讀長從長到短,再從短到長。雖然就當前形勢看來第二代短讀長測序技術在全球測序市場上仍然占有著**的優勢位置,但第三和第四代測序技術也已在這一兩年的時間中快速發展著。 測序技術的每一次變革,也都對基因組研究,疾病醫療研究,藥物研發,育種等領域產生巨大的推動作用。在這里我主要對當前的測序技術以及它們的測序原理做一個簡單的小結。圖1:測序技術的發展歷程 生命體遺傳信息的快速獲得對于生命科學的研究有著十分重要的意義。以上(圖1)所描述的是自沃森和克里克在1953年建立DNA雙螺旋結構以來,整個測序技術的發展歷程。 第一代測序技術 第一代DNA測序技術用的是1975年由桑格(Sanger)和考爾森(Coulson)開創的鏈終止法或者是1976-1977年由馬克西姆(Maxam)和吉爾伯特(Gilbert)發明的化學法(鏈降解),并在1977年,桑格測定了第一個基因組序列,是噬菌體X174的,全長5375個堿基1。 自此,人類獲得了窺探生命遺傳差異本質的能力,并以此為開端步入基因組學時代。研究人員在Sanger法的多年實踐之中不斷對其進行改進。在2001年,完成的**人類基因組圖譜就是以改進了的Sanger法為其測序基礎,Sanger法核心原理是:由于ddNTP的2’和3’都不含羥基,其在DNA的合成過程中不能形成磷酸二酯鍵,因此可以用來中斷DNA合成反應,在4個DNA合成反應體系中分別加入一定比例帶有放射性同位素標記的ddNTP(分為:ddATP,ddCTP,ddGTP和ddTTP),通過凝膠電泳和放射自顯影后可以根據電泳帶的位置確定待測分子的DNA序列(圖2)。這個網址為sanger測序法制作了一個小短片,形象而生動。 值得注意的是,就在測序技術起步發展的這一時期中,除了Sanger法之外還出現了一些其他的測序技術,如焦磷酸測序法、鏈接酶法等。 其中,焦磷酸測序法是后來Roche公司454技術所使用的測序方法2–4,而連接酶測序法是后來ABI公司SOLID技術使用的測序方法2,4,但他們的共同核心手段都是利用了Sanger1中的可中斷DNA合成反應的dNTP。圖2:Sanger法測序原理 第二代測序技術 總的說來,第一代測序技術的主要特點是測序讀長可達1000bp,準確性高達99.999%,但其測序成本高,通量低等方面的缺點,嚴重影響了其真正大規模的應用。因而第一代測序技術并不是*理想的測序方法。 經過不斷的技術開發和改進,以Roche公司的454技術、illumina公司的Solexa,Hiseq技術和ABI公司的Solid技術為標記的第二代測序技術誕生了。第二代測序技術大大降低了測序成本的同時,還大幅提高了測序速度,并且保持了高準確性,以前完成一個人類基因組的測序需要3年時間,而使用二代測序技術則僅僅需要1周,但在序列讀長方面比起第一代測序技術則要短很多。 表1和圖3對第一代和第二代測序技術各自的特點以及測序成本作了一個簡單的比較5,以下我將對這三種主要的第二代測序技術的主要原理和特點作一個簡單的介紹。圖3. 測序成本的變化 1.Illumine Illumina公司的Solexa和Hiseq應該說是目前全球使用量**的第二代測序機器,這兩個系列的技術核心原理是相同的2,4。這兩個系列的機器采用的都是邊合成邊測序的方法,它的測序過程主要分為以下4步,如圖4. (1)DNA待測文庫構建 利用超聲波把待測的DNA樣本打斷成小片段,目前除了組裝之外和一些其他的特殊要求之外,主要是打斷成200-500bp長的序列片段,并在這些小片段的兩端添加上不同的接頭,構建出單鏈DNA文庫。 (2)Flowcell Flowcell是用于吸附流動DN**段的槽道,當文庫建好后,這些文庫中的DNA在通過flowcell的時候會隨機附著在flowcell表面的channel上。每個Flowcell有8個channel,每個channel的表面都附有很多接頭,這些接頭能和建庫過程中加在DN**段兩端的接頭相互配對(這就是為什么flowcell能吸附建庫后的DNA的原因),并能支持DNA在其表面進行橋式PCR的擴增。 (3)橋式PCR擴增與變性 橋式PCR以Flowcell表面所固定的接頭為模板,進行橋形擴增,如圖4.a所示。經過不斷的擴增和變性循環,*終每個DN**段都將在各自的位置上集中成束,每一個束都含有單個DNA模板的很多分拷貝,進行這一過程的目的在于實現將堿基的信號強度放大,以達到測序所需的信號要求。  (4)測序 測序方法采用邊合成邊測序的方法。向反應體系中同時添加DNA聚合酶、接頭引物和帶有堿基特異熒光標記的4中dNTP(如同Sanger測序法)。這些dNTP的3’-OH被化學方法所保護,因而每次只能添加一個dNTP。 在dNTP被添加到合成鏈上后,所有未使用的游離dNTP和DNA聚合酶會被洗脫掉。接著,再加入激發熒光所需的緩沖液,用激光激發熒光信號,并有光學設備完成熒光信號的記錄,**利用計算機分析將光學信號轉化為測序堿基。 這樣熒光信號記錄完成后,再加入化學試劑淬滅熒光信號并去除dNTP 3’-OH保護基團,以便能進行下一輪的測序反應。 Illumina的這種測序技術每次只添加一個dNTP的特點能夠很好的地解決同聚物長度的準確測量問題,它的主要測序錯誤來源是堿基的替換,目前它的測序錯誤率在1%-1.5%之間,測序周期以人類基因組重測序為例,30x測序深度大約為1周。圖4. Illumina測序流程 2.Roche 454 Roche 454測序系統是第一個商業化運營二代測序技術的平臺。它的主要測序原理是(圖5 abc)2: (1)DNA文庫制備 454測序系統的文件構建方式和illumina的不同,它是利用噴霧法將待測DNA打斷成300-800bp長的小片段,并在片段兩端加上不同的接頭,或將待測DNA變性后用雜交引物進行PCR擴增,連接載體,構建單鏈DNA文庫(圖5a)。 (2)Emulsion PCR (乳液PCR,其實是一個注水到油的獨特過程) 454當然DNA擴增過程也和illumina的截然不同,它將這些單鏈DNA結合在水油包被的直徑約28um的磁珠上,并在其上面孵育、退火。 乳液PCR**的特點是可以形成數目龐大的獨立反應空間以進行DNA擴增。其關鍵技術是“注水到油”(水包油),基本過程是在PCR反應前,將包含PCR所有反應成分的水溶液注入到高速旋轉的礦物油表面,水溶液瞬間形成無數個被礦物油包裹的小水滴。這些小水滴就構成了獨立的PCR反應空間。理想狀態下,每個小水滴只含一個DNA模板和一個磁珠。 這些被小水滴包被的磁珠表面含有與接頭互補的DNA序列,因此這些單鏈DNA序列能夠特異地結合在磁珠上。同時孵育體系中含有PCR反應試劑,所以保證了每個與磁珠結合的小片段都能獨立進行PCR擴增,并且擴增產物仍可以結合到磁珠上。當反應完成后,可以破壞孵育體系并將帶有DNA的磁珠富集下來。進過擴增,每個小片段都將被擴增約100萬倍,從而達到下一步測序所要求的DNA量。 (3)焦磷酸測序 測序前需要先用一種聚合酶和單鏈結合蛋白處理帶有DNA的磁珠,接著將磁珠放在一種PTP平板上。這種平板上特制有許多直徑約為44um的小孔,每個小孔僅能容納一個磁珠,通過這種方法來固定每個磁珠的位置,以便檢測接下來的測序反應過程。 測序方法采用焦磷酸測序法,將一種比PTP板上小孔直徑更小的磁珠放入小孔中,啟動測序反應。測序反應以磁珠上大量擴增出的單鏈DNA為模板,每次反應加入一種dNTP進行合成反應。 如果dNTP能與待測序列配對,則會在合成后釋放焦磷酸基團。釋放的焦磷酸基團會與反應體系中的ATP硫酸化學酶反應生成ATP。生成的ATP和熒光素酶共同氧化使測序反應中的熒光素分子并發出熒光,同時由PTP板另一側的CCD照相機記錄,**通過計算機進行光信號處理而獲得*終的測序結果。 由于每一種dNTP在反應中產生的熒光顏色不同,因此可以根據熒光的顏色來判斷被測分子的序列。反應結束后,游離的dNTP會在雙磷酸酶的作用下降解ATP,從而導致熒光淬滅,以便使測序反應進入下一個循環。由于454測序技術中,每個測序反應都在PTP板上獨立的小孔中進行,因而能大大降低相互間的干擾和測序偏差。 454技術**的優勢在于其能獲得較長的測序讀長,當前454技術的平均讀長可達400bp,并且454技術和illumina的Solexa和Hiseq技術不同,它*主要的一個缺點是無法準確測量同聚物的長度。 如當序列中存在類似于PolyA的情況時,測序反應會一次加入多個T,而所加入的T的個數只能通過熒光強度推測獲得,這就有可能導致結果不準確。也正是由于這一原因,454技術會在測序過程中引入插入和缺失的測序錯誤。圖5. Roche 454測序流程 3.Solid技術 Solid測序技術是ABI公司于2007年開始投入用于商業測序應用的儀器。它基于連接酶法,即利用DNA連接酶在連接過程之中測序(圖6)2,4。它的原理是:圖6-a. Solid測序技術 (1)DNA文庫構建 片段打斷并在片段兩端加上測序接頭,連接載體,構建單鏈DNA文庫。 (2)Emulsion PCR Solid的PCR過程也和454的方法類似,同樣采用小水滴emulsion PCR,但這些微珠比起454系統來說則要小得多,只有1um。在擴增的同時對擴增產物的3’端進行修飾,這是為下一步的測序過程作的準備。3’修飾的微珠會被沉積在一塊玻片上。 在微珠上樣的過程中,沉積小室將每張玻片分成1個、4個或8個測序區域(圖6-a)。Solid系統**的優點就是每張玻片能容納比454更高密度的微珠,在同一系統中輕松實現更高的通量。 (3)連接酶測序 這一步是Solid測序的獨特之處。它并沒有采用以前測序時所常用的DNA聚合酶,而是采用了連接酶。Solid連接反應的底物是8堿基單鏈熒光探針混合物,這里將其簡單表示為:3’-XXnnnzzz-5’。 連接反應中,這些探針按照堿基互補規則與單鏈DNA模板鏈配對。探針的5’末端分別標記了CY5、Texas Red、CY3、6-FAM這4種顏色的熒光染料(圖6-a)。這個8堿基單鏈熒光探針中,第1和第2位堿基(XX)上的堿基是確定的,并根據種類的不同在6-8位(zzz)上加上了不同的熒光標記。 這是Solid的獨特測序法,兩個堿基確定一個熒光信號,相當于一次能決定兩個堿基。這種測序方法也稱之為兩堿基測序法。當熒光探針能夠與DNA模板鏈配對而連接上時,就會發出代表第1,2位堿基的熒光信號,圖6-a和圖6-b中的比色版所表示的是第1,2位堿基的不同組合與熒光顏色的關系。 在記錄下熒光信號后,通過化學方法在第5和第6位堿基之間進行切割,這樣就能移除熒光信號,以便進行下一個位置的測序。不過值得注意的是,通過這種測序方法,每次測序的位置都相差5位。 即第一次是第1、2位,第二次是第6、7位……在測到末尾后,要將新合成的鏈變性,洗脫。接著用引物n-1進行第二輪測序。引物n-1與引物n的區別是,二者在與接頭配對的位置上相差一個堿基(圖6-a. 8)。 也即是,通過引物n-1在引物n的基礎上將測序位置往3’端移動一個堿基位置,因而就能測定第0、1位和第5、6位……第二輪測序完成,依此類推,直至第五輪測序,*終可以完成所有位置的堿基測序,并且每個位置的堿基均被檢測了兩次。 該技術的讀長在2×50bp,后續序列拼接同樣比較復雜。由于雙次檢測,這一技術的原始測序準確性高達99.94%,而15x覆蓋率時的準確性更是達到了99.999%,應該說是目前第二代測序技術中準確性**的了。但在熒光解碼階段,鑒于其是雙堿基確定一個熒光信號,因而一旦發生錯誤就容易產生連鎖的解碼錯誤。圖6-b. Solid測序技術 第三代測序技術 測序技術在近兩三年中又有新的里程碑。以PacBio公司的SMRT和Oxford Nanopore Technologies納米孔單分子測序技術,被稱之為第三代測序技術。與前兩代相比,他們**的特點就是單分子測序,測序過程無需進行PCR擴增。 其中PacBio SMRT技術其實也應用了邊合成邊測序的思想5,并以SMRT芯片為測序載體?;驹硎牵?DNA聚合酶和模板結合,4色熒光標記 4 種堿基(即是dNTP),在堿基配對階段,不同堿基的加入,會發出不同光,根據光的波長與峰值可判斷進入的堿基類型。 同時這個 DNA 聚合酶是實現超長讀長的關鍵之一,讀長主要跟酶的活性保持有關,它主要受激光對其造成的損傷所影響。PacBio SMRT技術的一個關鍵是怎樣將反應信號與周圍游離堿基的強大熒光背景區別出來。 他們利用的是ZMW(零模波導孔)原理:如同微波爐壁上可看到的很多密集小孔。小孔直徑有考究,如果直徑大于微波波長,能量就會在衍射效應的作用下穿透面板而泄露出來,從而與周圍小孔相互干擾。如果孔徑小于波長,能量不會輻射到周圍,而是保持直線狀態(光衍射的原理),從而可起保護作用。 同理,在一個反應管(SMRTCell:單分子實時反應孔)中有許多這樣的圓形納米小孔, 即 ZMW(零模波導孔),外徑 100多納米,比檢測激光波長小(數百納米),激光從底部打上去后不能穿透小孔進入上方溶液區,能量被限制在一個小范圍(體積20X 10-21 L)里,正好足夠覆蓋需要檢測的部分,使得信號僅來自這個小反應區域,孔外過多游離核苷酸單體依然留在黑暗中,從而實現將背景降到**。 另外,可以通過檢測相鄰兩個堿基之間的測序時間,來檢測一些堿基修飾情況,既如果堿基存在修飾,則通過聚合酶時的速度會減慢,相鄰兩峰之間的距離增大,可以通過這個來之間檢測甲基化等信息(圖7)。 SMRT技術的測序速度很快,每秒約10個dNTP。但是,同時其測序錯誤率比較高(這幾乎是目前單分子測序技術的通?。?,達到15%,但好在它的出錯是隨機的,并不會像第二代測序技術那樣存在測序錯誤的偏向,因而可以通過多次測序來進行有效的糾錯。圖7.PacBio SMRT測序原理 Oxford Nanopore Technologies公司所開發的納米單分子測序技術與以往的測序技術皆不同,它是基于電信號而不是光信號的測序技術5。該技術的關鍵之一是,他們設計了一種特殊的納米孔,孔內共價結合有分子接頭。 當DNA堿基通過納米孔時,它們使電荷發生變化,從而短暫地影響流過納米孔的電流強度(每種堿基所影響的電流變化幅度是不同的),靈敏的電子設備檢測到這些變化從而鑒定所通過的堿基(圖8)。 該公司在去年基因組生物學技術進展年會(AGBT)上推出第一款商業化的納米孔測序儀,引起了科學界的極大關注。納米孔測序(和其他第三代測序技術)有望解決目前測序平臺的不足,納米孔測序的主要特點是:讀長很長,大約在幾十kb,甚至100 kb;錯誤率目前介于1%至4%,且是隨機錯誤,而不是聚集在讀取的兩端;數據可實時讀取;通量很高(30x人類基因組有望在一天內完成);起始DNA在測序過程中不被破壞;以及樣品制備簡單又便宜。理論上,它也能直接測序RNA。 納米孔單分子測序計算還有另一大特點,它能夠直接讀取出甲基化的胞嘧啶,而不必像傳統方法那樣對基因組進行bisulfite處理。這對于在基因組水平直接研究表觀遺傳相關現象有極大的幫助。并且改方法的測序準確性可達99.8%,而且一旦發現測序錯誤也能較容易地進行糾正。但目前似乎還沒有應用該技術的相關報道。圖8. 納米孔測序 其他測序技術 目前還有一種基于半導體芯片的新一代革命性測序技術——Ion Torrent6。該技術使用了一種布滿小孔的高密度半導體芯片, 一個小孔就是一個測序反應池。當DNA聚合酶把核苷酸聚合到延伸中的DNA鏈上時,會釋放出一個氫離子,反應池中的PH發生改變,位于池下的離子感受器感受到H+離子信號,H+離子信號再直接轉化為數字信號,從而讀出DNA序列(圖9)。 這一技術的發明人同時也是454測序技術的發明人之一——Jonathan Rothberg,它的文庫和樣本制備跟454技術很像,甚至可以說就是454的翻版,只是測序過程中不是通過檢測焦磷酸熒光顯色,而是通過檢測H+信號的變化來獲得序列堿基信息。 Ion Torrent相比于其他測序技術來說,不需要昂貴的物理成像等設備,因此,成本相對來說會低,體積也會比較小,同時操作也要更為簡單,速度也相當快速,除了2天文庫制作時間,整個上機測序可在2-3.5小時內完成,不過整個芯片的通量并不高,目前是10G左右,但非常適合小基因組和外顯子驗證的測序。 圖9. Ion Torrent 小結 以上,對各代測序技術的原理做了簡要的闡述,這三代測序技術的特點比較匯總在以下表1和表2中。其中測序成本,讀長和通量是評估該測序技術先進與否的三個重要指標。 第一代和第二代測序技術除了通量和成本上的差異之外,其測序核心原理(除Solid是邊連接邊測序之外)都是基于邊合成邊測序的思想。 第二代測序技術的優點是成本較之一代大大下降,通量大大提升,但缺點是所引入PCR過程會在一定程度上增加測序的錯誤率,并且具有系統偏向性,同時讀長也比較短。 第三代測序技術是為了解決第二代所存在的缺點而開發的,它的根本特點是單分子測序,不需要任何PCR的過程,這是為了能有效避免因PCR偏向性而導致的系統錯誤,同時提高讀長,并要保持二代技術的高通量,低成本的優點。 表1:測序技術的比較第X代公司平臺名稱測序方法檢測方法大約讀長(堿基數)優點相對局限性第一代ABI/生命技術公司3130xL-3730xL桑格-毛細管電泳測序法熒光/光學600-1000高讀長,準確度一次性達標率高,能很好處理重復序列和多聚序列通量低;樣品制備成本高,使之難以做大量的平行測序第一代貝克曼GeXP遺傳分析系統桑格-毛細管電泳測序法熒光/光學600-1000高讀長,準確度一次性達標率高,能很好處理重復序列和多聚序列;易小型化通量低;單個樣品的制備成本相對較高第二代Roche/454基因組測序儀FLX系統焦磷酸測序法光學230-400在第二代中**讀長;比第一代的測序通量大樣品制備較難;難于處理重復和同種堿基多聚區域;試劑沖洗帶來錯誤累積;儀器昂貴第二代IlluminaHiSeq2000,HiSeq2500/MiSeq可逆鏈終止物和合成測序法熒光/光學2x150很高測序通量儀器昂貴;用于數據刪節和分析的費用很高第二代ABI/Solid5500xlSolid系統連接測序法熒光/光學25-35很高測序通量;在廣為接受的幾種第二代平臺中,所要拼接出人類基因組的試劑成本**測序運行時間長;讀長短,造成成本高,數據分析困難和基因組拼接困難;儀器昂貴第二代赫利克斯Heliscope單分子合成測序法熒光/光學25-30高通量;在第二代中屬于單分子性質的測序技術讀長短,推高了測序成本,降低了基因組拼接的質量;儀器非常昂貴第三代太平洋生物科學公司PacBio RS實時單分子DNA測序熒光/光學~1000高平均讀長,比第一代的測序時間降低;不需要擴增;*長單個讀長接近3000堿基并不能**地將DNA聚合酶加到測序陣列中;準確性一次性達標的機會低(81-83%);DNA聚合酶在陣列中降解;總體上每個堿基測序成本高(儀器昂貴);第三代全基因組學公司GeXP遺傳分析系統復合探針錨雜交和連接技術熒光/光學10在第三代中通量**;在所有測序技術中,用于拼接一個人基因組的試劑成本**;每個測序步驟獨立,使錯誤的累積變得**低讀長; 模板制備妨礙長重復序列區域測序;樣品制備費事;尚無商業化供應的儀器第三代Ion Torrent/生命技術公司個人基因組測序儀(PGM) 合成測序法以離子敏感場效應晶體管檢測pH值變化100-200對核酸堿基的摻入可直接測定;在自然條件下進行DNA合成(不需要使用修飾過的堿基)一步步的洗脫過程可導致錯誤累積;閱讀高重復和同種多聚序列時有潛在困難;第三代牛津納米孔公司 gridION納米孔外切酶測序電流尚未定量有潛力達到高讀長;可以成本生產納米孔;無需熒光標記或光學手段切斷的核苷酸可能被讀錯方向;難于生產出帶多重平行孔的裝置表2:主流測序機器的成本測序比較以下圖10展示了當前全球測序儀的分布情況。圖中的幾個熱點區主要分布在中國的深圳(主要是華大),南歐,西歐和美國。圖10. 測序儀全球分布http://omicsmaps.com/#
    03-25 2016
  • 華大基因與長春光機所合作開發新型基因測序儀

    華大基因與長春光機所合作開發新型基因測序儀

    近日,華大基因董事長汪建帶隊一行三人到長春光機所洽談合作事宜。在長春光機所所長賈平研究員的陪同下,汪建董事長一行參觀了長春長光辰芯光電技術有限公司、長春光機所光學技術研發中心、超精密光學工程研究中心、光柵技術研發中心、發光學及應用國家重點實驗室等。在合作洽談會議上,汪建介紹了華大基因發展歷程及未來發展方向,喬彥峰研究員介紹了長春光機所現有與基因測序儀相關的技術基礎。隨后,汪建董事長和賈平所長針對合作事宜開展了充分溝通,*終,雙方達成了合作意向,共建股份制公司,公司定位為開發新型基因測序儀產品等。吉林省科技廳副廳長陳維友和吉林省科技廳高新處副處長楊景鵬應邀出席會議,長春光機所副所長宋志義、長春光機所所長助理楊懷江、長春光機所所長助理孫守紅、長春光機所基礎處處長項陽等人員出席會議。
    03-24 2016
  • *有影響力的醫療創新榜單

    *有影響力的醫療創新榜單

    科學努力植根于創新。沒有蜂擁而至的技術進步做基礎,醫學肯定會停滯不前。 當然,任何“**”醫學創新列表都是短的,那些值得列在表中的激增的新治療、診斷與設備等永遠也列不完。 我們在進步的道路上已經走了那么遠,模糊歷史也是值得回顧的。 我們所知道的*早的醫療創新過程之一是“環鉆”。在頭骨上鉆或者刮一個洞,可能會驅逐邪惡的靈魂,或給大腦減壓。在某個時間點上,這種做法普遍得令人驚訝。在歐洲、阿塞拜疆、中國、西伯利亞、北美南美等地都有使用過“環鉆”的證據。 考古學家們多年來發現了新石器時代數以千計的頭骨,5%-10%的頭骨上有“環鉆”特殊標記。在當時,這種原始手術可能被認為是有效和徹底的技術。值得慶幸的是,其他步驟逐漸代替了“環鉆”的使用。 隨著時間的推移,另一個重要的創新是麻醉的出現。Humphrey Davy雖然不是一個醫學專業人士,但他第一個發現了一氧化二氮的麻醉性能,并創造了笑氣(laugh gas)這個詞。不過直到1829年Davy去世,麻醉藥才普遍使用起來。 時間進一步推移,Alexander Fleming于1928年偶然發現了青霉素,成為**歷史意義的醫療創新。Fleming的這項工作標志著現代抗生素的誕生,多年來避免了數以百萬計的病人因感染導致的截肢和死亡。 “**”創新數不勝數,不勝枚舉。為了這篇文章,我們*近幾個月一直聯絡科學家和醫療專業人士。我們只問什么醫療創新(過去,現在和未來)*令他們喜悅,為什么此創新受到高的評價。 如下是結果,排名不分先后: 一、基因編輯 愛爾蘭貝爾法斯特大學藥學院Garry Laverty和他的團隊*近發明了一種短肽凝膠劑對抑制超級病菌感染很有希望。他認為*令人著迷的創新是基因編輯技術CRISPR(clustered regularly-interspaced short palindromic repeats)。 在CRISPR誕生前,想改造突變一個基因是相當費力的。先前需要大量時間和**進行的基因修飾現在可以快速便宜地進行。CRISPR的影響怎么強調也不為過。Nature上一篇雜志說:“CRISPR正在引起生物醫學研究的巨變”。 此技術來源于細菌用于對抗病毒感染的機制,與稱為Cas9的酶一起工作。Cas9利用一段引導RNA分子靶向到DNA,然后打斷基因或插入所需序列。每次使用費用僅30美元,而之前的技術需花費上千美元。 Laverty博士對CRISPR給予厚望?!?終能使我們通過消除有害DNA來消除基因疾病,它也有可能允許在人類基因組插入量身定做的基因序列,或去掉有害序列?!?nbsp;二、即時檢驗測序接下來的回答是遺傳主題。Ephraim Tsalik是杜克大學醫學院助理教授,他參與了區分病毒性疾病和細菌性疾病的檢測的設計。 他選擇的醫學創新是即時檢驗測序。即時檢驗測序是能采集組織樣本實時讀取DNA的手持設備,跳過了基于實驗室、花費時間的檢測。這種設備*終將發展為多種用途,從醫生辦公室到婆羅洲叢林都能用到。即時檢驗測序設備能馬上搜集到病人詳細的信息。 造成感染的細菌和病毒物種能輕松追蹤,不給那些不必要的抗生素處方留任何機會。對于AIDS這類疾病,病毒載量可以馬上確定,并以此為根據對治療做出相應調整。 三、心臟起搏器澳大利亞墨爾本大學的Thomas Oxley博士正在研究一種仿生大腦植入,能幫助癱瘓的病人用意念控制機器人外骨骼。他選擇的醫療創新是心臟起搏器。 簡而言之,心臟起搏器是使用電刺激跳進心臟跳動的醫療設備。這種設備在體內自然的心臟起搏過慢的情況,或心臟電傳導系統出現堵塞時使用。 第一個植入式版本于1958年在瑞典卡洛琳斯卡研究所由Rune Elmqvist和Ake Senning醫生設計安裝。Ame Larsson是世界上第一例植入式心臟起搏器病人,他終生佩戴過26個不同的心臟起搏器(小編:真夠折騰的)。Larsson在2001年去世,享年86歲,比起搏器發明人和醫生都長壽。 四、診斷納米傳感器  馬薩諸塞州的波士頓東北大學的Thomas Webster醫生目前正在致力于多個創新。他的其中一個項目是合成免疫細胞。他選的醫療創新是植入的納米傳感器——微小的植入和短暫停留,能得到病人細胞內的診斷。 傳感器是碳納米管構造,可以充當潛在疾病的早期預警系統。在病人意識到身體內的問題之前應對問題。它能檢出各種疾病的化學信號,在癥狀到來之前發出警告。 許多疾病在進展時完全沒有癥狀,如胰腺癌。問題越早發現,病人存活的幾率就越大。 五、人工耳蝸植入**一項創新是明尼蘇達大學Michael McAlpine教授提出的。他在3D打印技術和應用領域做研究工作。他*近創建的3D打印指南,在損傷后幫助再生神經的感覺和運動功能。 他選擇的醫療創新是人工耳蝸植入。這項技術是30年前Graeme Clark教授發明,這項技術改變了世界上成千上萬人的生活。這個電子器件和身體混合的設備,用令人意想不到的簡單卻優雅的方式,令聽覺喪失的人恢復聽覺。 到目前為止已有350,000的人工耳蝸植入。人工耳蝸植入與助聽器的工作方式不同,助聽器只是簡單的將傳入耳朵的聲音放大;人工耳蝸繞過耳朵受損的部分,直接刺激聽覺神經。雖然人工耳蝸提供的是不同于自然的聽力,但它令使用者與周圍的交流變得簡單,并再一次享受自然對話,甚至第一次自然對話。 毫無疑問,醫學進步在未來一定會更加難以置信。為了恰當的結束本文,我們引述偉大科學發明家Arthur Clarke的一句話:“任何足夠先進的技術和魔法沒什么兩樣”。
    03-24 2016
  • 新尿檢方法能迅速發現食物中的抗癌物質

    新尿檢方法能迅速發現食物中的抗癌物質

    尿檢就可以幫助研究人員判斷出哪些食物可以幫助預防癌癥了,我們就可以告別那些不可靠的飲食日志和膳食回顧了。 喬治城倫巴第綜合癌癥研究中心研發出來一種新方法,可以快速評估人尿液中的特定食物源化合物。他們的方法以后有希望代替不可靠的飲食日志,來人口研究中飲食對癌癥的影響,可以幫助科學家精確鑒別*有效的抗癌食物。 這項研究中,研究人員主要關注了十字花科蔬菜,美國國立衛生研究院的***籍華人健康研究證明十字花科蔬菜對肺癌患者有保護作用,這項涉及了6.3萬人。十字花科蔬菜是亞洲人飲食的主要組成,包括卷心菜,抱子甘藍,西蘭花,菜花,白菜和豆瓣菜等。 Marcin Dyba博士支持了這一研究,他表示,我們已經清楚這些食物對健康有益,我們研發出來的方法只需要10分鐘,就可以檢測到與這些蔬菜相關的特定化合物,可以幫助研究人員精確測定這些分子的消耗量。Dyba博士將在4月18日在新奧爾良召開的美國癌癥研究協會的年會上介紹這一研究成果。 Dyba稱,尿檢還能幫助科學家們找到十字花科蔬菜中的哪些化合物與癌癥預防相關性*強。這些發現可以在動物模型上測試,如果能發現對癌癥有顯著預防作用的分子,就可以推薦人們多食用該蔬菜或研制出膳食增補劑。我們對這些分子的作用機制非常感興趣,我們不能僅僅依靠志愿者自己記錄的飲食日志來完成這項工作。 喬治城的科學家們將***籍華人健康研究中收集到的尿樣用這種方法進行了測試,以驗證方法的可靠性。 本研究早在1993年就在***開始了,初衷是飲食對癌癥和其他疾病的影響。匹茲堡大學癌癥研究所的Jian-Min Yuan博士主持了這一研究,研究對6.3萬***中老年居民進行了問卷調查,問卷是由165項詳細的量化食物攝取頻率的問題組成的,此后,對參與者進行了電話隨訪。2005年,一半的參與者提供了生物樣品,研究者在尿樣中發現了十字花科蔬菜中可能對癌癥有預防作用的化合物。 這種新的尿檢方法在尿樣中尋找來自十字花科蔬菜的異硫氰酸酯類化合物(ITCs)等,動物和細胞實驗都表明不同類型的ITCs有不同的抗癌活性,這表明這些化合物的抗癌活性是不通的。由于目前還沒有方法能找到哪種ITCs的活性**,所以,我們研發了這個方法。
    03-22 2016
  • 貝恩資本1.5億美元競逐中國高端醫療市場

    貝恩資本1.5億美元競逐中國高端醫療市場

    美國私募股權巨頭貝恩資本公司計劃以1.50億美元收購亞太醫療集團多數股份,這也是貝恩公司旗下新成立的亞洲基金的第一單交易。 據《華爾街日報》消息,貝恩資本已在*近從亞太醫療集團(Asia Pacific Medical Group)現有股東手中收購了該集團的多數股份,而這筆1.5億美元的投資包含用于業務擴張的資金。雙方預計將于周四宣布達成協議。 據悉,亞太醫療集團是一家美國人創建的國際醫療機構,自1992年成立以來,一直為中國和東南亞提供世界**的醫療保健服務。集團旗下擁有14家診所和7家醫院,是中國成長*快的國際醫療保健提供商。 的確,這個由35位美國醫生創辦的公司,是*早進入中國的國際化醫療服務集團。據了解,目前亞太醫療集團在華已有超過數十家醫療機構,包括上海天壇普華醫院、北京天壇普華醫院、北京普華門診部、北京天壇普華干細胞治療中心以及1992年就與復旦大學附屬華山醫院合作建立的上海伽瑪刀醫院。 亞太醫療集團旗下私立醫院定位于高端于特色診療,主要為在中國居住的外籍人士提供診療服務,包括各國駐華大使,國際學校師生等等。 隨著中國人口老齡化日趨嚴重,醫療消費水平提高,高端醫療需求也在逐步擴張,中國私立醫院的數量也在迅速增長。德勤一份報告顯示,截至2014年6月,中國私立醫院比例已達47%,近年來該比例還在不斷擴大。 貝恩公司與醫療產業私募資本協會(HCPEA)共同發布的2015年全球醫療健康產業私募報告顯示,2014年起,全球資本重心就開始轉向中國和印度,而此前幾年還主要集中于發達的亞洲國家;尤其在中國,越來越有利的監管環境,加速了2014年醫療技術領域的發展。 中國政府進一步開放醫療服務空間,允許外國資本100%投入北京、天津和上海等7個省市地區,同時政府鼓勵醫院分級診療、醫生多點執業,使得私人服務提供商能接入公共體系的醫療專家渠道。 近年來金融資本不斷出手,投入中國醫療市場。例如高瓴資本集團與美國梅奧臨床醫院系統創建合資企業在中國投資醫院領域,復星醫藥私有化和睦家醫院等。 貝恩資本在投資領域主要專注于消費零售業、金融和商業服務業、醫療保健業、工業能源和TMT(科技、媒體和電信)行業。 早在2014年底,貝恩資本亞洲基金二期通過設立特殊目的公司和獅橋融資租賃(中國)有限公司聯合宣布貝恩資本成功收購獅橋80%的股權后,獅橋租賃的創始人和執行董事萬鈞就表示,將加大對醫療、工業裝備方面等其他垂直領域的投入,在醫療方面要把很多零散的資源整合起來,能夠獲得更大的采購、服務、醫療技術水平的提高等。 貝恩資本認為,中國逐漸開放的政策正越來越吸引資本進入,這些政策將為醫療保健相關投資的盈利能力提供支持。
    03-21 2016
  • Science子刊:消除測序偏好的有效方法

    Science子刊:消除測序偏好的有效方法

    為了跟蹤免疫系統激活后的抗體生成情況,研究人員對攜帶抗體生產指令的mRNA進行了測序分析?!敖陙頊y序技術取得了很大的進展,測序速度顯著加快,測序成本大幅下降。然而目前的測序方法并不適合分析抗體RNA,”領導這項研究的Sai Reddy教授解釋道。機體產生的抗體種類非常多,測序抗體RNA需要很高的靈敏性和準確性。 Reddy及其同事創建了一個使用基因條碼的控制系統,對RNA測序進行補充和完善。這個系統與計算機分析結合起來,大大提升了RNA測序的精確性,消除了人為引入突變和RNA分子相對濃度的干擾?!巴ㄟ^這種方式我們能夠去除超過98%的測序錯誤,”Reddy實驗室的博士后Tarik Khan說。 研究人員將自己開發的體系命名為分子擴增指紋(MAF)。他們在PCR擴增之前給每個RNA分子隨機打上****的“條碼”。他們還在擴增過程中添加另一種條碼,以記錄PCR擴增的偏好。計算機分析可以通過這些條碼將原始抗體RNA與測序中發生突變的分子區分開,還能夠確定抗體RNA原本所占的比例。 這項研究為人們展示的抗體測序方法,適合多種免疫學研究。Reddy正在與多家制藥公司合作,把這一方法用于抗體藥物和疫苗的開發?!拔覀兊募夹g可以精確反映HIV感染者體內的免疫應答過程,”Reddy教授指出?!斑^去人們只能發現免疫應答中豐度較高的抗體,測序可以準確快速的鑒定那些罕見抗體?!?nbsp;蛋白質分析需要抗體達到較高的濃度,無法檢測疾病早期產生的少量抗體分子。這項研究中的測序方法有望幫助人們盡早診斷出癌癥和自身免疫疾病。 新一代測序技術在爆炸式發展的同時,也衍生出許多其他技術創新。RNA深度測序(RNA-Seq)就是其中之一,這項技術使我們對細胞發育及其調控機制的理解,達到了****的深度和廣度。那么RNA測序究竟可不可靠呢? 由美國FDA牽頭的測序質量控制(SEQC)項目對RNA測序的準確性、可重現性和信息含量進行了綜合性評估。其初步調查結果發表在2014年09月的Nature Biotechnology雜志上,石樂明教授是這篇文章的通訊作者之一。 研究人員用RNA參照樣本在全球多個實驗室的Illumina HiSeq、Life Technologies SOLiD、Roche 454平臺上進行檢測,主要評估RNA測序在接頭區域和差異性表達譜中的表現,并將其與芯片和定量PCR(qPCR)進行比較。研究表明,數據分析的算法會對RNA測序產生很大影響,不同算法生成的轉錄本數據存在很大差異。 浙江大學和哈佛大學的研究人員在Cell Reports雜志上發表了一項單細胞mRNA-seq研究?;虮磉_變異是小鼠胚胎干細胞(ESC)的一個重要特征,但人們一直不清楚這背后的具體原因。研究人員通過分析小鼠胚胎干細胞發現,這些細胞表現出的異質性是血清培養造成的。 他們在其中鑒定了高度變異的基因簇,以及獨特的染色質狀態。研究顯示,雙價基因(bivalent gene)更容易出現表達變異。進一步研究表明,無血清培養可以減少小鼠ESC的異質性和轉錄組變異。這意味著,細胞內的網絡變異大多是細胞外的培養環境造成的。 在生物學中,位置信息是很重要的。mRNA是活躍基因的功能性拷貝,它們在活組織中的定位,往往與細胞和組織的生長發育調控有關。以往人們要磨碎細胞才能同時分析多個mRNA,但這樣就無法了解mRNA在細胞中的定位。 哈佛醫學院Wyss研究所的科學家們解決了這個問題。George M Church和Je Hyuk Lee領導團隊開發了熒光原位RNA測序(FISSEQ)技術,該技術可以在固定的細胞和組織中,獲得全基因組范圍的基因表達圖譜。
    03-21 2016
  • 以基因捕獲技術為核心的iGeneTech獲數千萬A輪融資

    以基因捕獲技術為核心的iGeneTech獲數千萬A輪融資

    今日,iGeneTech即艾吉泰康生物科技(北京)有限公司宣布,完成數千萬人民幣的A輪融資,由普華資本旗下新成立的醫療健康產業基金領投,聯想之星、貝殼社基金跟投。 iGeneTech是一家定位于生物技術本身技術創新的平臺型公司,以基因捕獲技術為核心,致力于為行業內的企業、臨床檢驗所及醫院提供基因檢測產品的設計、制造、測試服務及數據服務,業務范圍包括基因組捕獲、甲基化捕獲、基因組編輯效應優化和轉錄組捕獲等。 公司創始人兼CEO杭興宜博士曾經提到,基因檢測的中小企業缺乏核心捕獲、建庫技術,而臨檢所和醫院無法部署上游工業化產業,國外企業難于全流程服務,加上現有產品和服務昂貴低效,造成基因檢測行業發展困難重重。 在臨床應用中,靶向捕獲是主要市場,因為它必須要**。但從技術上,國內缺乏成熟產品設計和驗證體系,而iGeneTech公司正在解決這個痛點。 基因捕獲技術是檢測必備的關鍵技術,指把基因組上的一些片段抓取下來進行測序,是**醫學的基礎之一。 而在基因捕獲方面,iGeneTech具備兩項自主研發的核心技術:液相芯片捕獲技術和多重PCR捕獲技術。前者適合于大區域和插入、缺失捕獲,后者對于小區域和點突變捕獲效率極高。 另外公司的延伸核心技術還包括高通量探針設計及評估系統(對液相芯片捕獲測序)、超高多重PCR引物設計及評估系統(針對多重PCR測序)和合成生物學(探針/引物合成)及基因組編輯(CRISPR/Cas9等)脫靶效應驗證體系。 **醫療推動基因檢測行業興起后,出現了面向大眾消費和檢測機構兩類基因創業公司。而基因捕獲是基因檢測的關鍵技術,卻也是大量中小企業不具備的技術。iGeneTech正是定位于B端的企業、機構。 領投基金的創始合伙人、前經緯創投資深醫療投資人周密表示,iGeneTech從事的是一個相當專業的領域?!拔覀儓F隊在廣泛接觸基因測序行業上下游的基礎上,確認基因捕獲技術具有極高的技術壁壘、也是基于NGS的基因檢測發展的一個瓶頸和樞紐環節。 iGenetech團隊是一個非常有經驗和技術積累的團隊,我們相信他們能打破該領域海外少數巨頭的壟斷,有望成為中國**醫療產業發展的催化劑?!?nbsp;此外,周密還提到,iGenetech與其之前在經緯創投主導投資的基因大數據PaaS公司-Genedock(聚道科技)也非?;パa和協調,兩家公司合起來能夠為基于NGS的基因檢測行業提供一條龍完整產業鏈服務。 目前,iGeneTech已與40多家機構合作,大部分為基因檢測中小企業,其中也包括部分臨床檢驗所、醫院和健康體檢機構等。 iGeneTech團隊目前已有26人,在融資后團隊將繼續擴大,并致力于掌握核心技術和自主知識產權,形成更加穩定和優質的標準化產品產業鏈,自主制定企業和行業的生產與數據標準,掌握核心產品和服務的定價權。
    03-18 2016
  • NG BIMS新一代靈瓏樣本庫信息化管理系統發布!

    NG BIMS新一代靈瓏樣本庫信息化管理系統發布!

    什么是“BIMS靈瓏系統”? 符合中國生物樣本庫建設標準、流程規范,同時增加樣本信息管理的靈活性和個性化。靈動、便捷、**;“瓏”與中國的象征“龍”諧音,是中國結合世界經驗,自主創新的新一代生物樣本信息管理系統。 “BIMS靈瓏系統“的六大特性 平臺化:BIMS可以與臨床系統對接,整合臨床數據;可以與儀器對接,實驗、質控數據無縫集成。圖形化:BIMS整合3D圖形化技術,設備信息直觀展示。圖形化的直觀性有利于樣本庫管理者在管理過程中分析、存取和監控樣本,通過圖形了解樣本庫儲存設備以及其中的樣本分布。標準化:BIMS通過的認證和符合的規范FDA 21 CFR Part 11(電子簽名),只有符合此規范管理的樣本臨床數據和研究才能被接受,相關新藥、疾病研究才能通過FDA審批。模板化:系統根據各種疾病資源信息化內容、相關專家的專業特長設置為專業管理模板,逐步縮小樣本庫之間同源樣本中信息化方面的差異性,為信息統一的可能性鋪路。 個性化:用戶可以根據業務需要定制樣本管理流程。比如樣本收集項目需要審核流程,但有的樣本庫不一定要審核批準步驟,BIMS的個體化體現在讓使用者根據需要來減少或增加任何一個工作流程中的步驟。安全化:開啟SSL加密,確保數據全出安全,保障數據不泄露。身份驗證就權限授權,確保只有經過審批的人員才能訪問系統及指定的系統功能和數據。此外,BIMS靈瓏系統具有可擴展性和便攜性:支持不同類型樣本庫管理,支持多種存儲設備和凍存耗材,標簽支持打印任意內容和條碼,**度權限管理,多語言。
    03-17 2016
  • 深挖Pittcon亮相的新產品:小型、手持分析儀器篇

    深挖Pittcon亮相的新產品:小型、手持分析儀器篇

    海洋光學Flame NIR 除了大型分析儀器,展會上不乏含金量極高的小型分析產品。由于現場檢測的需求及實驗室空間限制,也有越來越多的分析儀器在向便攜和小型化發展。車載、手持等形式也更加受到市場的歡迎。下面來看看Pittcon2016上展出的一些小型分析儀器。 海洋光學展臺強調了食品安全、農業、環境監測及污染分析、生物化學和科學研究幾大應用領域。其全新一代微型近紅外光譜儀Flame  NIR在pittcon2016的展臺上實現了首秀。 據了解Flame  NIR的價格比上一代產品降低了不少,約為傳統同類產品的1/3,且體積更為小巧,可以適用于更多現場測量,也可集成在其他設備中作為檢測核心部件。相比傳統的光譜儀,Flame  NIR臺間測量結果差異小,非常適合批量使用。 海洋光學展位上還有一款即將上市的小型通訊光譜產品Blaze,它具備網絡通訊能力,將在今年下半年正式上市。其特點是可以直接通過手機等移動終端進行操作和數據讀取,使得光譜儀成為一個現場隨身設備。WIFI或藍牙等通訊功能使Blaze可容易的接入控制網絡,方便的成為工業控制系統的節點。海洋光學小型通訊光譜Blaze 除了大型分析儀器,賽默飛在此次盛會上還發布了UV-Vis 微量分光光度計和手持XRF分析儀。NanoDrop OneC UV-Vis 微量分光光度計,具有較高分辨率和觸控屏幕,是緊湊而經濟的分光光度計。它具有自動調整路徑長度范圍的功能,這使得在測定濃縮樣品時不需要稀釋即可得到準確結果。賽默飛NanoDrop OneC UV-Vis 微量分光光度計 在XL2和XL3之后,賽默飛于2015年9月**推出了Niton XL5 XRF分析儀,此次Pittcon之后也將在中國市場上市。據介紹XL5是目前市場上*輕的XRF,僅有1.3公斤重。 它的小巧能使操作者檢測到更多之前無法檢測的位置,減少使用疲勞,同時也可以達到非常低的檢出限。另外,新的電子處理器可實現實時數據結果輸出。賽默飛Niton XL5 XRF分析儀 TSI公司去年推出的ChemLite激光誘導擊穿金屬分析儀也出現在了Pittcon的展臺上。ChemLite是分析合金成分的手持激光儀器,采用人眼安全激光器,元素覆蓋范圍較廣,而且檢出限非常低。 同時,TSI展位上還有一款外形與ChemLite相似的小型激光拉曼塑料分析儀Polmax。Polmax是世界上首款能準確識別淺色和深色塑料的手持儀器,能夠幫助操作者快速、有效地識別塑料種類。TSI ChemLite激光誘導擊穿金屬分析儀(左)和Polmax激光拉曼塑料分析儀(右) 必達泰克(B&WTEK)在Pittcon2016除了展出用于安檢、藥物分析等領域的幾種手持拉曼之外,還推出了去年剛剛上市的便攜式LIBS金屬多元素分析儀NanoLIBS。該產品可以使用鋰電池供電,搭載Linux,Android和windows系統,并配置有****水平的化學計量學軟件,可實現物料的定性、定量分析檢測。必達泰克便攜式LIBS金屬多元素分析儀NanoLIBS 賽萊默**展示了**的脈沖火焰光度檢測器(PFPD)5383,相比上一代產品5383的檢測器在電子和信號處理方面有了改進,選擇性和靈敏度都得到了提高。在配備GC或GCMS使用時,5383能夠幫助操作者分別測定低水平的S、P及其他26種分析物。其相應軟件也做到了在計算、優化和分析方面的簡單易用。賽萊默5383 PFPD IonSense去年推出的DART與QDa小型質譜聯用的DART-QDa系統也**登上了Pittcon的展臺。其與其他DART產品的區別是,可以移動和車載使用。IonSense DART-QDa系統
    03-17 2016
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